超微量分光光度計(jì)憑借其高靈敏度、快速檢測(cè)和微量樣本需求的特點(diǎn),已成為現(xiàn)代生命科學(xué)實(shí)驗(yàn)室中核酸與蛋白質(zhì)定量的核心工具。其核心作用體現(xiàn)在以下三個(gè)方面:
一、高靈敏度與寬檢測(cè)范圍,實(shí)現(xiàn)精準(zhǔn)定量
傳統(tǒng)分光光度計(jì)需1-2mL樣本體積,而超微量分光光度計(jì)僅需0.5-2μL樣本,通過表面張力固定于檢測(cè)基座表面,極大降低了珍貴樣本(如臨床活檢組織、稀有細(xì)胞裂解液)的消耗。其檢測(cè)下限可達(dá)0.5ng/μL(dsDNA),上限擴(kuò)展至37,500ng/μL(dsDNA),覆蓋從低豐度樣本到高濃度純化產(chǎn)物的全范圍定量需求。例如,在NGS文庫(kù)構(gòu)建中,可準(zhǔn)確測(cè)定文庫(kù)濃度至nM級(jí)別,確保文庫(kù)池均衡性。
二、多波長(zhǎng)同步檢測(cè),保障數(shù)據(jù)可靠性
通過230nm、260nm、280nm、320nm四波長(zhǎng)同步掃描,可同時(shí)獲取核酸純度(A260/A280)、蛋白質(zhì)純度(A280/A260)及鹽離子污染(A230/A260)信息。例如,純DNA的A260/A280比值應(yīng)為1.8-2.0,若低于1.8可能提示蛋白質(zhì)或苯酚污染;而A260/A230比值低于2.0則表明存在鹽類或有機(jī)溶劑殘留。這種多參數(shù)分析模式顯著提升了定量結(jié)果的準(zhǔn)確性,避免了單波長(zhǎng)檢測(cè)的局限性。
三、快速無損檢測(cè),優(yōu)化實(shí)驗(yàn)流程
單次檢測(cè)僅需2-5秒,且樣本無需稀釋或特殊處理(如熒光染料標(biāo)記),直接使用原始樣本即可完成檢測(cè)。這一特性在高通量實(shí)驗(yàn)中尤為重要——例如,在CRISPR基因編輯實(shí)驗(yàn)中,可快速測(cè)定gRNA合成產(chǎn)物的濃度與純度,指導(dǎo)后續(xù)轉(zhuǎn)染體系優(yōu)化;在蛋白質(zhì)表達(dá)純化過程中,可實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)洗脫峰中目標(biāo)蛋白的濃度變化,及時(shí)調(diào)整收集策略。此外,檢測(cè)后樣本可回收用于下游實(shí)驗(yàn)(如PCR、Westernblot),避免了傳統(tǒng)方法中樣本損耗導(dǎo)致的實(shí)驗(yàn)重復(fù)。
總結(jié):超微量分光光度計(jì)通過微量樣本檢測(cè)、多參數(shù)分析和快速無損操作,為核酸與蛋白質(zhì)定量提供了高效、精準(zhǔn)的解決方案,成為現(xiàn)代分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室的核心設(shè)備。